Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
24 июня 2003 года
Дата введения -
30 июня 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ДЕСМЕДИФАМА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ
ЗОНЫ И АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ МЕТОДОМ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1409-03
1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им.
Ф.Ф. Эрисмана (акад. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В.
Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.
Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич); при
участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.
Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией
по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения
Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003
г.
4. Введены с 30 июня 2003 г.
5. Введены впервые.
Настоящие методические указания устанавливают метод
высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в
воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе массовой концентрации
десмедифама в диапазонах 0,1 - 1,0 мг/куб. м (воздух рабочей
зоны); 0,008 - 0,08 мг/куб. м (атмосферный воздух).
Десмедифам - действующее вещество препарата БЕТАНЕС, КЭ (70 г/л
десмедифама + 90 г/л фенмедифама + 110 г/л зтофумезата), фирма-
производитель "Август", Россия.
Этил 3-фенилкарбамоилоксифенилкарбамат (IUPAC)
Эмпирическая формула: C16H16N2O4 М. м.: 300,3
Бесцветное кристаллическое вещество со слабым ароматическим
запахом. Температура плавления 120 -С. Давление паров при 25 -С:
-5
4,0 х 10 мПа. Растворимость в органических растворителях при
20 -С (г/куб. дм): изопропанол, ацетон - 400, метанол - 180;
этилацетат - 149; хлороформ - 80; толуол - 1,2; гексан - 0,5.
Растворимость в воде при 25 -С - 7 мг/куб. дм.
Десмедифам стабилен в водной кислой среде, гидролизуется в
нейтральной и щелочной средах: DT50 - 70 дней (рН 5); 20 ч (рН 7);
10 мин. (рН 9).
Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.
Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная
токсичность (LD50) для крыс > 10250 мг/кг, для мышей > 5000 мг/кг;
острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов > 4000 мг/кг;
острая ингаляционная токсичность (LK50) для крыс > 7400 мг/куб. м.
Область применения препарата. Десмедифам рекомендуется к
применению в качестве контактного селективного гербицида против
однолетних двудольных и злаковых сорняков на посевах сахарной,
столовой, кормовой свеклы.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) десмедифама в воздухе
рабочей зоны - 1 мг/куб. м, ориентировочно безопасный уровень
воздействия (ОБУВ) в атмосферном воздухе - 0,01 мг/куб. м.
1. Погрешность измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не
превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.
2. Метод измерения
Измерения концентраций десмедифама выполняют методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной
фазе с ультрафиолетовым детектором.
Концентрирование десмедифама из воздуха осуществляют на
бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят
ацетоном.
Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.
Определению не мешают компоненты препаративной формы.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым
детектором с переменной длиной
волны (фирмы Perkin-Elmer, США) Номер Госреестра
15945-97
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ
(ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург)
или аспирационное устройство ЭА-1 ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67 ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2,
цена деления 1 -С, пределы измерения
0 - 55 -С ТУ 215-73Е
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1000 куб. см ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2 класса
точности, вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 куб. см ГОСТ 29227
Пробирки градуированные, вместимостью
5 или 10 куб. см ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2 класса точности,
вместимостью 50 и 500 куб. см ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или
лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Десмедифам с содержанием действующего
вещества не менее 99,5%, ВНИИХСЗР
Метиловый спирт (метанол), х.ч. ГОСТ 6995
Вода бидистиллированная, деионизованная
или перегнанная над КМnО4 ГОСТ 6709
Кислота ортофосфорная, ч., 85% ГОСТ 6652
Ацетон ГОСТ 2603
Изопропиловый спирт ТУ 6-09-402-87
Допускается использование реактивов иных производителей с
аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Бумажные фильтры "синяя лента",
обеззоленные ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы грушевидные на шлифе, вместимостью
100 куб. см ГОСТ 10394
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью
250 куб. см ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный ГОСТ 10696
Пробирки центрифужные ГОСТ 25336
Ректификационная колонна с числом
теоретических тарелок не менее 30
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М
или ротационный вакуумный испаритель
В-169 фирмы Buchi, Швейцария ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические, вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Набор для фильтрации растворителей
через мембрану
Холодильник водяной, обратный ГОСТ 9737
Хроматографическая колонка стальная,
длиной 20 см, внутренним диаметром 2 мм,
содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением
5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного
хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм
Допускается применение хроматографических колонок и другого
оборудования с аналогичными или лучшими техническими
характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности,
установленные для работ с токсичными, едкими,
легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.
4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного
хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии
с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих
квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на
жидкостном хроматографе.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу
проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) -С и относительной
влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в
условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят очистку ацетона (при
необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление
растворов, кондиционирование хроматографической колонки,
установление градуировочной характеристики, отбор проб.
7.1. Очистка ацетона.
Растворитель сушат над молекулярными ситами 4А и подвергают
фракционной перегонке на ректификационной колонне, целиком
собранной из стекла с числом теоретических тарелок не менее 30.
Сосуд для перегонки погружают в водяную баню и через приемник
пропускают медленно струю сухого азота. Затем температуру водяной
бани повышают до 70 - 75 -С и прибор промывают парами ацетона,
после чего холодильник заполняют водой. До начала отбора главной
фракции приемник несколько раз промывают дистиллятом. Перегонку
продолжают до тех пор, пока в сосуде для перегонки не останется
приблизительно 100 куб. см ацетона. Температуру водяной бани
следует снижать по мере уменьшения объема ацетона, во всех случаях
она не должна превышать температуру кипения ацетона более чем на
20.
7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ.
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 470 куб. см
воды, 1 куб. см ортофосфорной кислоты, 50 куб. см изопропилового
спирта, добавляют 480 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют и
дегазируют.
7.3. Кондиционирование хроматографической колонки.
Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.2) в течение 30 мин.
при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. до установления
стабильной базовой линии.
7.4. Приготовление градуировочных растворов.
7.4.1. Исходный раствор десмедифама для градуировки
(концентрация 1 мг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб.
см помещают 0,1 г десмедифама, доводят до метки метанолом,
тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение
3 месяцев.
Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем
последовательного разбавления исходного стандартного раствора.
7.4.2. Раствор N 1 десмедифама для градуировки (концентрация 10
мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1
куб. см исходного стандартного раствора десмедифама с
концентрацией 1 мг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют метанолом до
метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 5 десмедифама для градуировки
(концентрация 0,05 - 0,5 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы
вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 куб. см
стандартного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п.
7.4.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п.
7.2), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с
концентрацией десмедифама 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 мкг/куб. см,
соответственно.
Растворы хранятся в холодильнике не более 3 суток.
7.5. Отбор проб.
7.5.1. Воздух рабочей зоны.
Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ
12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к
воздуху рабочей зоны". В течение 15 мин. последовательно отбирают
3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 мин. с объемным
расходом 1 - 5 куб. дм/мин. через бумажный фильтр "синяя лента",
помещенный в фильтродержатель.
Для измерения концентрации десмедифама на уровне 0,5 ПДК
воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1 куб. дм воздуха. Срок
хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в
холодильной камере при 4 -С - 7 дней.
7.5.2. Атмосферный воздух.
Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ
17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения
загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух со
скоростью 5 куб. дм/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя
лента", помещенный в фильтродержатель.
Для измерения концентрации десмедифама на уровне 0,8 ОБУВ
атмосферного воздуха необходимо отобрать 25 куб. дм воздуха.
Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые
пакеты, в холодильной камере при 4 -С - 7 дней.
7.6. Установление градуировочной характеристики.
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади
пика (отн. единицы) от концентрации десмедифама в растворе
(мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4
растворам для градуировки N 2 - 5.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуиро-
вочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по
п. 7.6.1. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.
Устанавливают площадь пика десмедифама.
7.6.1. Условия хроматографирования.
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
- жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-
Elmer (США);
- колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм,
содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: метанол - изопропиловый спирт - вода -
ортофосфорная кислота (48:5:47:0,1, по объему).
Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.
Рабочая длина волны: 240 нм.
Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Ориентировочное время выхода десмедифама: 11,4 - 11,7 мин.
Линейный диапазон детектирования: 1 - 10 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор
десмедифама с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют подвижной
фазой (подготовленной по п. 7.2).
Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2
стандартных растворов различной концентрации. Если значения
площади отличаются более чем на 5% от данных, заложенных в
градуировочную характеристику, ее строят заново, используя
свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.
8. Выполнение измерений
Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан
вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см ацетона, помещают на
встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды
обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 куб. см.
Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на
ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35
-С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого
воздуха, остаток растворяют в 10 куб. см (воздух рабочей зоны) или
4 куб. см (атмосферный воздух) подвижной фазы (подготовленной по
п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных
в п. 7.6.1.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз.
Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика
определяют концентрацию десмедифама в хроматографируемом растворе.
Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование
холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного
фильтра.
9. Обработка результатов измерений
Массовую концентрацию десмедифама в пробе воздуха рабочей зоны
(атмосферного воздуха), X, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:
Х = С х W / V ,
20(0)
где:
С - концентрация десмедифама в хроматографируемом растворе,
найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной
площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
куб. см;
V - объем пробы воздуха, отобранного для анализа,
20(0)
приведенного к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура
20 -С) или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст.,
температура 0 -С), куб. дм.
V = 0,386 х Р х ut / (273 + T),
20
V = 0,357 х Р х ut / (273 + T),
0
где:
Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в
аспиратор), С;
Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;
u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;
t - длительность отбора пробы, мин.
Примечание. Идентификация и расчет концентрации десмедифама в
пробах могут быть проведены с помощью программ обработки
хроматографических данных с применением компьютера, включенного в
аналитическую систему.
10. Оформление результатов измерений
_
За результат анализа (X) принимается среднее арифметическое
_
результатов двух параллельных определений X и Х (X = (X +
1 2 1
Х ) / 2), расхождение между которыми не превышает значений
2
норматива оперативного контроля сходимости (d): |X - X | <= d.
1 2
_
d = d х Х / 100, мг/куб. м,
отн.
d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;
d - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен
отн.
10%).
Результат количественного анализа представляют в виде:
_
- результат анализа X (мг/куб. м), характеристика погрешности
_
дельта, %, Р = 0,95 или Х +/- ДЕЛЬТА мг/куб. м, Р = 0,95,
_
дельта х Х
ДЕЛЬТА = ----------, мг/куб. м.
100
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что
и погрешность.
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений
осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ
"Внутренний контроль качества результатов количественного
химического анализа".
12. Разработчики
Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н., Гарбузова А.А.
(Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи
Московской обл.).
|
