Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
16 марта 2003 года
Дата введения -
1 июля 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРАЛКОКСИДИМА
В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1230-03
1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им.
Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В.
Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.
Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич) при
участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.
Веселов). Разработчики методик контроля указаны в конце каждой из
них.
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией
по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. Утверждены и введены в действие Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем
Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН
Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.
4. Введены впервые.
1. Вводная часть
Фирма производитель: Зенека (Великобритания).
Торговое название: Грасп 80% ВДГ.
Действующее вещество: тралкоксидим [2-1(этоксиимино)пропил]-3-
гидрокси-5-мезитилциклогекс-2-енон (номенклатура ИЮПАК).
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H NO .
20 27 3
Молекулярная масса: 329.
Белый порошок без запаха.
Температура плавления: 106 -С.
-7
Давление паров (20 -С): 4 х 10 Па.
Коэффициент распределения н-октанол/вода (20 -С): 2,1.
Растворимость в воде (22 -С): 6 мг/л (рН 5,2)
7 мг/л (рН 6,5)
8850 мг/л (рН 9,0).
Растворимость в органических растворителях (г/л) (24 -С):
метанол 25
ацетон 89
хлористый метилен > 500
толуол 213
гексан 18.
Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная
токсичность для крыс LD = 934 - 1324 мг/кг; острая дермальная
50
токсичность для крыс LD > 2000 мг/кг; острая ингаляционная
50
токсичность для крыс LC = 3,5 мг/л воздуха.
50
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
ПДК в воде - 0,008 мг/куб. дм;
ОДК в почве - 0,06 мг/кг;
МДУ в зерне хлебных злаков - 0,02 мг/кг.
Область применения. Грасп 80% в.д.г. - послевсходовый
селективный системный гербицид для борьбы с сорняками в посевах
пшеницы и ячменя.
2. Методика определения остаточных количеств тралкоксидима
в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип методики
Методика основана на определении тралкоксидима методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с
ультрафиолетовым детектором после экстракции вещества из воды
хлороформом, из почвы и растительного материала ацетонитрилом,
очистки экстрактов перераспределением в системе вода - хлороформ и
на концентрирующих патронах-колонках Диапак-диол и Диапак-амин.
Идентификация тралкоксидима проводится по времени удерживания, а
количественное определение - методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
Методика специфична в присутствии пестицидов, применяемых на
зерновых культурах.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ И СТАТИСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ
(Р = 0,95, N = 20)
---------T-------T-------------T----------T--------T-------------¬
¦Анализи-¦Предел ¦ Диапазон ¦Среднее ¦Стан- ¦Доверительный¦
¦руемый ¦обнару-¦ определяемых¦значение ¦дартное ¦ интервал ¦
¦объект ¦жения, ¦концентраций,¦определе- ¦откло- ¦ среднего ¦
¦ ¦мг/л, ¦ мг/л, мг/кг ¦ния, - % ¦нение, S¦ результата, ¦
¦ ¦мг/кг ¦ ¦ ¦ ¦ +/- % ¦
+--------+-------+-------------+----------+--------+-------------+
¦Вода ¦0,005 ¦0,005 - 0,05 ¦83,2 ¦4,4 ¦2,1 ¦
+--------+-------+-------------+----------+--------+-------------+
¦Почва ¦0,01 ¦0,01 - 0,1 ¦81,0 ¦7,8 ¦3,7 ¦
+--------+-------+-------------+----------+--------+-------------+
¦Зерно ¦0,01 ¦0,01 - 0,1 ¦81,0 ¦7,0 ¦3,3 ¦
+--------+-------+-------------+----------+--------+-------------+
¦Солома ¦0,05 ¦0,05 - 0,5 ¦84,7 ¦8,1 ¦3,8 ¦
L--------+-------+-------------+----------+--------+--------------
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Тралкоксидим, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 99,4% (Зенека)
Ацетон, ос.ч., 9 - 5 ТУ 2633-00-4-11291058-94
Ацетонитрил, ос.ч., сорт 2, Криохром,
Санкт-Петербург
Вода бидистиллированная <*> или
деионизированная ГОСТ 7602-72
Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78
Калия карбонат, х.ч. ГОСТ 4221-76
Калия перманганат ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, х.ч. ГОСТ 4161-77
Концентрирующие патроны Диапак-диол,
АО БиоХимМак (117899, Москва,
Воробьевы горы, МГУ) ТУ 4215-002-05451931-94
Концентрирующие патроны Диапак-амин,
АО БиоХимМак (117899, Москва,
Воробьевы горы, МГУ) ТУ 4215-002-05451931-94
Натрия сульфат безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрия тетраборат, х.ч. ГОСТ 4199-76
Фосфора пентоксид, ч. МРТУ 6-09-5759-69
Хлороформ медицинский ГОСТ 20015-74
Эфир диэтиловый ГОСТ 6265-74
Фильтры бумажные, синяя лента ТУ 6-09-1678
--------------------------------
<*> Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с перманганатом
калия, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Высокоэффективный жидкостный
хроматограф фирмы Beckman (насос
114 м, ультрафиолетовый детектор 166)
или аналогичный
Самописец регистрирующий фирмы
Kipp@Zonen ВD41 или аналогичный
Хроматографическая колонка фирмы
Merck LiChrosorb NH , стальная
2
250 х 4,6 мм, 10 мкм или колонка
АО БиоХимМак (117899, Москва,
Воробьевы горы, МГУ)
Диасорб-130 Амин
Шприц хроматографический фирмы
Hamilton на 100 мкл или аналогичный
Центрифуга Beckman, модель J2-21 или
аналогичная
Весы аналитические типа ВЛР-200 ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос ГОСТ 10696-75
Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73
Вакуумный роторный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-76
или аналогичный
Воронка Бюхнера ГОСТ 0147-73
Воронки делительные емкостью 100,
500 мл ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 8613-75
Колба Бунзена ГОСТ 5614-75
Колбы круглодонные со шлифом на 10,
100 и 250 мл ГОСТ 9737-70
Колбы конические плоскодонные на 100
и 250 мл ГОСТ 25336-82
Колбы мерные на 100 мл ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные на 1, 2, 5 мл ГОСТ 20292-74Е
Цилиндры мерные
на 25, 50, 100, 250 мл ГОСТ 1770-74
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов
питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств
пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979). Отобранные пробы зерна и
соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной
или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Для длительного
хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в
отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут
храниться в течение года. Пробы воды хранят при температуре не
выше 4 -С в течение 2 дней, при температуре -18 -С - в течение
месяца. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице,
почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка растворителей
Гексан сушат над хлоридом кальция, затем перегоняют над пен-
токсидом фосфора. Диэтиловый эфир сушат двумя порциями хлорида
кальция, периодически встряхивая, затем перегоняют над хлоридом
кальция.
2.5.2. Приготовление стандартных растворов
Взвешивают 100 мг тралкоксидима и растворяют его в ацетонитриле
в мерной колбе на 100 мл, получая стандартный раствор N 1 с
концентрацией тралкоксидима 1 мг/мл. Берут 1 мл этого раствора в
мерную колбу на 100 мл и доводят до метки ацетонитрилом, получая
стандартный раствор N 2. Стандартные растворы N 1 и 2 можно
хранить в холодильнике в течение 3 месяцев.
Рабочие стандартные растворы тралкоксидима концентрацией 2,5;
1,25; 0,5; 0,25; 0,1; 0,05 мкг/мл готовят из стандартного раствора
N 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом. Их
используют для построения калибровочного графика и фортификации
образцов (внесения в образцы для оценки полноты извлечения
тралкоксидима). Эти стандартные растворы можно использовать в
течение 7 дней при хранении в холодильнике.
2.5.3. Приготовление подвижной фазы
Для ВЭЖХ анализа тралкоксидима используют подвижную фазу,
содержащую 80% ацетонитрила и 20% воды (по объему). Перед анализом
фазу дегазируют, пропуская через нее газообразный гелий со
скоростью 20 мл/мин. в течение 5 мин. и помещая сосуд с фазой в
ультразвуковую ванну на 1 мин.
2.5.4. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика вводят в инжектор
хроматографа последовательно 5 раз по 100 мкл каждого рабочего
стандартного раствора, измеряют высоты или площади пиков,
рассчитывают среднее значение высоты или их площади для каждой
концентрации и строят график зависимости высоты или площади пика
от концентрации тралкоксидима.
2.5.5. Кондиционирование патронов-колонок Диапак-диол и Диапак-
амин
Патрон устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в
патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10
мл, который используют как емкость для элюента. Патрон промывают
два раза 3 мл гексана.
Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой
экстрактов образцов со скоростью не более 2 мл/мин., не допуская
высыхания поверхности патрона.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения тралкоксидима на
концентрирующих патронах-колонках Диапак
2.5.6.1. Диапак-диол. Приливают в круглодонную колбу на 10 мл 1
мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1
мкг/мл, добавляют 3 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и
наносят на кондиционированный патрон. Обмывают колбу 6 мл этой же
смеси и также наносят на патрон. Элюирование проводят под вакуумом
со скоростью не более 1 мл/мин. Элюат собирают в круглодонную
испарительную колбу, упаривают его, остаток растворяют в 1 мл
подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима
по п. 2.7, которое должно составлять около 100% от внесенного
количества.
2.5.6.2. Диапак-амин. Наносят на кондиционированный патрон 1 мл
стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1
мкг/мл и элюируют его 10 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Элюат
собирают в испарительную колбу, упаривают, остаток растворяют в 1
мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание
тралкоксидима по п. 2.7, которое должно составлять около 100% от
внесенного количества.
2.6. Описание методики определения
2.6.1. Вода
Образец предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл
переносят в делительную воронку на 500 мл, добавляют 30 мл 0,01 М
раствора тетрабората натрия и трижды экстрагируют хлороформом
порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 2 мин.
После полного разделения слоев нижнюю органическую фазу через
воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в испарительную
круглодонную колбу. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают
на вакуумном роторном испарителе при 40 -С до объема примерно 1 мл
и остатки раствора высушивают током азота. Сухой остаток
растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на
содержание тралкоксидима по п. 2.7.
2.6.2. Почва
2.6.2.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую
плоскодонную колбу на 100 мл помещают навеску почвы 20 г,
приливают 40 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 45 мин.
Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный
фильтр "синяя лента". К остатку почвы в колбе добавляют еще 40 мл
ацетонитрила и процедуру экстракции повторяют. Почву на фильтре
промывают 20 мл ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают
аликвоту 50 мл, эквивалентную 10 г почвы, добавляют 15 мл
деионизированной воды и раствор упаривают на вакуумном роторном
испарителе при 40 -С до водного остатка. Водный остаток
количественно переносят в делительную воронку на 100 мл, добавляют
20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю
органическую фазу через воронку с прокаленным сернокислым натрием
сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции
хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый
экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 -С
примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую
очистку проводят по п. 2.6.2.2.
2.6.2.2. Очистка экстрактов на патронах-колонках Диапак. Сухой
остаток растворяют в 4 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и
наносят на кондиционированный патрон Диапак-диол. Затем 6 мл этой
же смеси обмывают колбу и также наносят на патрон. Элюат собирают,
наносят на кондиционированный патрон Диапак-амин и после
пропускания через патрон отбрасывают. Тралкоксидим элюируют из
патрона Диапак-амин 10 мл ацетона в круглодонную испарительную
колбу. Ацетоновый раствор упаривают на вакуумном роторном
испарителе при 40 -С до объема примерно 1 мл, который высушивают
током азота. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для
ВЭЖХ и анализируют по п. 2.7.
Нанесение растворов на патроны и элюирование проводят под
вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин.
2.6.3. Зерно и солома
2.6.3.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую
колбу на 250 мл помещают измельченный образец зерна (10 г) или
соломы (5 г). Приливают 50 мл (для соломы - 80 мл) ацетонитрила и
встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на
воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". Процедуру
экстракции повторяют еще раз, и фильтруют экстракт через тот же
фильтр. Растительные остатки на фильтре промывают 20 мл
ацетонитрила. Экстракты объединяют, берут аликвоту - 60 мл для
зерна и 90 мл для соломы, добавляют к ним 15 мл деионизированной
воды и упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 -С до
водного остатка. Далее остаток подвергают центрифугированию (2 -С,
20000 об./мин., 15 мин.) и фильтруют через бумажный фильтр "синяя
лента" в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа
и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу
через воронку с прокаленным сернокислым натрием сливают в
испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом
повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт
упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 -С примерно до 1
мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку
проводят по п. 2.6.2.2, а анализ на хроматографе - по п. 2.7.
2.7. Условия хроматографирования
Высокоэффективный жидкостный
хроматограф фирмы Beckman (насос
114 м, ультрафиолетовый детектор 166)
или аналогичный
Самописец регистрирующий фирмы
Kipp@Zonen BD41 или аналогичный
Хроматографическая колонка фирмы
Merck Lichrosorb NH стальная 250 х 4,6 мм,
2
10 мкм или колонка АО БиоХимМак
(117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ)
Диасорб-130 Амин
Объем вводимой пробы: 100 мкл
Подвижная фаза: ацетонитрил - вода
(80:20, по объему)
Скорость потока подвижной фазы: 0,8 мл/мин.
Длина волны детектора: 280 нм
Чувствительность УФ-детектора: 0,01 AUFS
Скорость протяжки ленты самописца: 2 мм/мин.
Температура колонки: комнатная
Время выхода тралкоксидима: 7,5 - 8,5 мин.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание тралкоксидима рассчитывают методом абсолютной
калибровки по формуле:
H x C x V
1 ст
C = ------------ x p,
100 H x m
ст
где:
С - содержание тралкоксидима в анализируемом объекте
(мг/кг, мг/л);
Н - высота пика образца (мм);
1
Н - высота пика стандарта (мм);
ст
С - концентрация стандартного раствора тралкоксидима
ст
(мкг/мл);
V - объем экстракта (мл);
m - масса или объем анализируемого образца (г, мл);
р - содержание тралкоксидима в аналитическом стандарте (%).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при
работе с органическими растворителями и токсичными веществами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений
осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного
химического анализа".
5. Разработчики
Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук, Горбатов В.С., вед.
научн. сотр., канд. биол. наук, Бондарева Т.А., научн. сотр.
Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.
127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1, УНКЦ "Агроэкология
пестицидов и агрохимикатов".
|
