Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
16 марта 2003 года
Дата введения -
1 июля 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИФЛОКСИСТРОБИНА В ВОДЕ,
ПОЧВЕ, ЯБЛОКАХ И ЕГО МЕТАБОЛИТА ЦГА 321113 В ВОДЕ И ПОЧВЕ
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1232-03
1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им.
Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В.
Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.
Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. А.В. Довгилевич) при
участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.
Веселов). Разработчики методик контроля указаны в конце каждой из
них.
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией
по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. Утверждены и введены в действие Главным государственным
санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем
Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН
Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.
4. Введены впервые.
1. Вводная часть
Фирма-производитель: Сингента (Швейцария).
Торговое название: ЗАТО, ФЛИНТ.
Действующее вещество: трифлоксистробин (ЦГА 279202).
(Е,Е)-метоксиимино-{2-[1-(3-трифторметилфенил)-этилиденамино-
оксиметил]-фенил)}уксусной кислоты метиловый эфир (ИЮПАК).
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H F N O .
20 19 3 2 4
Молекулярная масса: 408,4.
Белый порошок без запаха.
Температура плавления: 72,9 -С.
-6
Давление паров при 25 -С: 3,4 х 10 Па.
Растворимость (г/л) при 25 -С: вода - 0,0006, гексан - 11,
толуол - 500, дихлорметан - 500, метанол - 76, ацетон - 500,
этилацетат - 500.
Стабильность к гидролизу при 20 -С: DT = 3139 дней
50
(рН 5), 80,1 дня (рН 7), 1,1 дня (рН 9).
В биологически активных почвах в анаэробных условиях
трифлоксистробин быстро разрушается: DT < 1,1 дня, DT = 2 - 3
50 90
дня.
Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная
токсичность (LD ) для крыс - более 5000 мг/кг; острая дермальная
50
токсичность (LD ) для крыс - более 2000 мг/кг; острая
50
ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 4646 мг/куб. м.
50
Трифлоксистробин не оказывает раздражающего действия на кожу и
слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и
сенсибилизирующими свойствами.
Трифлоксистробин токсичен для дафний, рыб и водорослей в
лабораторном эксперименте.
Гигиенические нормативы:
ПДК в воде водоемов - 0,03 мг/куб. дм;
ОДК в почве - 0,2 мг/кг;
МДУ в яблоках и грушах - 0,1 мг/кг.
Основной метаболит трифлоксистробина: ЦГА 321113.
(Е,Е)-метоксиимино-{2-[1-(3-трифторметилфенил)-этилиденамино-
оксиметил]-фенил}уксусная кислота (ИЮПАК).
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H F N O .
19 17 3 2 4
Молекулярная масса: 394,4.
Белый порошок без запаха.
Другие физико-химические и токсикологические характеристики
основного метаболита трифлоксистробина отсутствуют.
В биологически активных почвах в аэробных условиях метаболит
ЦГА 321113 достаточно стабилен: DT = 110 дней, DT = 279 дней.
50 90
Область применения препарата. Трифлоксистробин - синтетический
фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба
Strobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга
грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и
плодовых культур. Обладает защитным и лечебно-профилактическим
действием.
Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под
торговым названием Зато, ВДГ (500 г/кг) в яблоневых и грушевых
садах в качестве средства борьбы с возбудителями мучнистой росы,
парши, пятнистостей и болезней при хранении с нормой расхода
препарата 0,10 - 0,15 кг/га при 4 - 6-кратной обработке (до и
после цветения) за сезон с 10 - 14-дневными интервалами.
Трифлоксистробин - весьма лабильное вещество и при попадании в
воду или почву достаточно быстро гидролизуется с образованием
довольно устойчивого соединения - (Е,Е)-метоксиимино-{2-[1-(3-
трифторметилфенил)-этилиденамино-оксиметил]-фенил}уксусной кислоты
(ЦГА 321113). В яблоках трифлоксистробин разрушается слабо.
2. Методика определения остаточных количеств
трифлоксистробина в воде, почве, яблоках и его метаболита
ЦГА 321113 в воде и почве газохроматографическим методом
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип методики
Методика основана на газохроматографическом определении
трифлоксистробина и его метаболита ЦГА 321113 (в виде метилового
эфира) на неподвижной фазе OV-17 с использованием
электронзахватного детектора (ДЭЗ) после экстракции препарата из
воды гексаном, из почвы и яблок водным ацетоном, а метаболита из
подкисленной воды хлористым метиленом и из почвы водным ацетоном
при ультразвуковой обработке, предварительной очистки экстракта
перераспределением в системе несмешивающихся растворителей,
метилирования метаболита диазометаном до трифлоксистробина и
окончательной очистки экстрактов на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной
калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии
пестицидов, применяемых при возделывании яблоневых садов.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА
-----------------------------------------------------------------¬
¦ Метрологические параметры, р = 0,95, n = 20 ¦
+------T--------T--------------T-------T--------T-------T--------+
¦Анали-¦Предел ¦ Диапазон ¦Среднее¦Стан- ¦Относи-¦Довери- ¦
¦зируе-¦обнару- ¦ определяемых ¦значе- ¦дартное ¦тельное¦тельный ¦
¦мый ¦жения, ¦ концентраций,¦ние оп-¦откло- ¦откло- ¦интервал¦
¦объект¦мг/куб. ¦ мг/куб. дм, ¦ределе-¦нение, S¦нение, ¦средне- ¦
¦ ¦дм, ¦ мг/кг ¦ния, % ¦ ¦DS ¦го, % ¦
¦ ¦мг/кг ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------+--------+--------------+-------+--------+-------+--------+
¦ Трифлоксистробин ¦
+------T--------T--------------T-------T--------T-------T--------+
¦Вода ¦0,0005 ¦0,0005 - 0,005¦93,3 ¦5,3 ¦2,4 ¦+/- 5,0 ¦
+------+--------+--------------+-------+--------+-------+--------+
¦Почва ¦0,01 ¦0,01 - 0,1 ¦93,6 ¦6,6 ¦2,9 ¦+/- 6,2 ¦
+------+--------+--------------+-------+--------+-------+--------+
¦Яблоки¦0,02 ¦0,02 - 0,2 ¦93,3 ¦5,9 ¦2,6 ¦+/- 5,5 ¦
+------+--------+--------------+-------+--------+-------+--------+
¦ ЦГА 321113 ¦
+------T--------T--------------T-------T--------T-------T--------+
¦Вода ¦0,0005 ¦0,0005 - 0,005¦93,8 ¦4,6 ¦2,1 ¦+/- 4,3 ¦
+------+--------+--------------+-------+--------+-------+--------+
¦Почва ¦0,01 ¦0,01 - 0,1 ¦86,3 ¦5,3 ¦2,4 ¦+/- 4,9 ¦
L------+--------+--------------+-------+--------+-------+---------
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Трифлоксистробин, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 99,9% (Новартис, Швейцария)
ЦГА 321113, аналитический стандарт
с содержанием д.в. 99,0% (Новартис, Швейцария)
Ацетон, ч.д.а. ГОСТ 2603-79
Вода бидистиллированная ГОСТ 7602-72
Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78
Калия перманганат ГОСТ 20490-75
Калий углекислый, х.ч. ГОСТ 4221-76
Кальция хлорид ГОСТ 4161-77
Кислота серная, х.ч. ГОСТ 4204-77
Кислота хлористоводородная, х.ч. ГОСТ 3118-77
Натрия гидроксид, х.ч. ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий двууглекислый, х.ч. ГОСТ 83-79
Натрия хлорид, х.ч. ГОСТ 4233-77
N-метил-N-нитрозо-п-толуолсульфонамид
(Мерк, Германия)
или N-нитрозометилмочевина ТУ 6-09-11-1643-82
Спирт метиловый, х.ч. ГОСТ 6995-77
Толуол ГОСТ 5789-78
Хлористый метилен ГОСТ 12794-80
Этилацетат ГОСТ 22300-76
Эфир диэтиловый ГОСТ 6562-74
Элюент N 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат, 95:5, по объему
Элюент N 2 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат, 90:10, по объему
Силикагель для адсорбционной хроматографии
(Вельм, Германия) I степени активности
или силикагель КСК (60 - 100 меш.)
Стекловата
Целит 535 (2 - 15 мкм) /Серва, Германия/
или аналогичный
Фильтры бумажные "синяя лента" ТУ 6-09-16-78
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф газовый с детектором по захвату
электронов Tracor 570 (США) или другой
аналогичного типа ("Кристалл 2000 М")
Колонка хроматографическая, стеклянная,
1800 х 2 мм, неподвижная фаза - 3% OV-17
на Хромосорбе W(HP) (0,15 - 0,18 мм)
Колонка хроматографическая, стеклянная,
1800 х 2 мм, неподвижная фаза - 3% SE-30
на Газ-хром Q (0,15 - 0,20 мм)
Микрошприц емкостью 10 мкл, МШ-10Ф ТУ 64-1-2850
Баня ультразвуковая, модель D-50 Branson
Inst. Co., США или другая аналогичного типа
Весы аналитические типа ВЛР-200 ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос ГОСТ 10696-75
Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73
Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63
Иономер ЭВ-74 или аналогичный ГОСТ 22261-76
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Ротационный испаритель тип ИР-1М ТУ 25-11-917-76
Сито с диаметром отверстий 1 мм
Баня водяная ТУ 46-22-603-75
Воронка Бюхнера ГОСТ 0147-73
Воронки делительные вместимостью
100, 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 8613-75
Колба Бунзена ГОСТ 5614-75
Колбы круглодонные на шлифе
вместимостью 100, 250 и 500 мл ГОСТ 9737-70
Колбы конические с притертыми пробками
вместимостью 250 мл ГОСТ 25336-82
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные вместимостью 20, 100 мл ГОСТ 25336-82
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми
пробками вместимостью 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75
Цилиндры мерные вместимостью 25, 50,
100, 250 и 500 мл ГОСТ 1770-74
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов
питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств
пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979).
Отобранные пробы почвы и яблок хранят в стеклянной или
полиэтиленовой таре в холодильнике не более трех дней. Для
длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого
состояния и хранят в холодильнике; пробы яблок хранят до анализа в
морозильной камере при температуре -18 -С. Пробы воды хранят при
температуре не выше 4 -С в течение 3 дней, при температуре -18 -С
- в течение месяца.
Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями
диаметром 1 мм, а яблоки измельчают.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и
перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и
хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями
концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция
кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно
промывают водой, 2%-м раствором гидроксида натрия и снова водой,
после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора
двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO и 2 г К СО ).
4 2 3
Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл
свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата
железа в 50 мл воды с добавлением 1,5 г концентрированной серной
кислоты). Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5%-м
раствором перманганата калия, 5%-м раствором гидроксида натрия и
водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W(HP)) засыпают в
стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают
в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и
стабилизируют в токе азота при температуре 250 -С в течение 8 - 10
ч.
2.5.3. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор трифлоксистробина с содержанием
100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего
99,9% д.в., в толуоле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в
холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,025; 0,05;
0,125 и 0,25 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора
трифлоксистробина соответствующим последовательным разбавлением
толуолом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более 3 дней.
При изучении полноты открывания трифлоксистробина в модельных
матрицах используются ацетоновые растворы вещества.
Основной стандартный раствор метаболита ЦГА 321113 с
содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата,
содержащего 99,0% д.в., в ацетоне в мерной колбе на 100 мл.
Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Из основного стандартного раствора метаболита готовят
разбавлением ацетоном рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,5 и
2,5 мкг/мл, которые хранят в холодильнике не более 3 дней. Рабочие
растворы используются при изучении полноты открывания метаболита в
воде и почве. При расчете количества вводимого в матрицу
метаболита учитывают соотношение молекулярных масс ЦГА 321113 и
трифлоксистробина.
2.5.4. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа
вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора трифлоксистробина с
концентрацией 0,025, 0,05, 0,125 и 0,25 мкг/мл. Осуществляют не
менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты
хроматографического пика для каждой концентрации. Строят
калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в
мм от концентрации трифлоксистробина в растворе в мкг/мл.
2.5.5. Приготовление раствора диазометана в эфире
В круглодонной колбе на 100 мл растворяют 5 г N-метил-N-нитрозо-
п-толуолсульфонамида в 16 мл смеси диэтилового эфира и метанола
(1:1). Колбу присоединяют к холодильнику, нижний конец которого
снабжен алонжем с отводом, проходящим через резиновую пробку с
отводом и погруженным в слой эфира (40 мл) на дне приемника.
Приемник охлаждают смесью льда и соли. В капельницу помещают 15 мл
50%-го раствора едкого калия.
Реакцию начинают добавлением в реакционный сосуд раствора
едкого калия по каплям, избегая бурного вскипания реакционной
массы. Об окончании реакции судят по прекращению выделения
диазометана в диэтиловый эфир.
2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним
диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и
приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 5
г силикагеля в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего
края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия
высотой 1 см. Колонку промывают последовательно 50 мл элюента N 2
и 30 мл элюента N 1 со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего
она готова к работе.
2.5.7. Проверка хроматографического поведения трифлоксистробина
на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл
стандартного раствора трифлоксистробина с концентрацией 10 мкг/мл.
Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в
3 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл
элюента N 1, затем 70 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в
секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток
растворяют в 2 мл толуола и анализируют на содержание
трифлоксистробина по п. 2.7.
Фракции, содержащие трифлоксистробин, объединяют, упаривают
досуха, остаток растворяют в 4 мл толуола и вновь анализируют по
п. 2.7. Рассчитывают содержание трифлоксистробина в элюате,
определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для
очистки экстракта объем элюента.
Примечание. Профиль вымывания трифлоксистробина может меняться
при использовании новой порции сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1. Экстракция трифлоксистробина и метаболита ЦГА 321113 и
очистка экстракта
2.6.1.1. Вода. В делительную воронку емкостью 250 мл помещают
100 мл предварительно отфильтрованной воды. Добавляют 20 мл
гексана и встряхивают 1 мин. Верхний органический слой отделяют,
собирая в грушевидную колбу на 100 мл. Водную фазу экстрагируют
гексаном еще дважды порциями по 20 мл. Объединенную органическую
фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают
на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 -С.
Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.
Водную фазу, оставшуюся после экстракции гексаном, переносят в
делительную воронку емкостью 250 мл, подкисляют 1 н HCl до рН 2 и
трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 20 мл.
Объединенную органическую фазу, содержащую метаболит
трифлоксистробина, пропускают через слой безводного сульфата
натрия и упаривают небольшими порциями в 20-мл грушевидной колбе
на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 -С.
Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.2. Яблоки. К навеске (25 г) измельченного материала
добавляют 100 мл смеси ацетон - вода (2:1, по объему),
гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. и суспензию перемешивают
в течение 20 мин. на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г
целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный
фильтр в колбу на 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси
ацетон - вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта
отбирают аликвоту раствора (около 15 мл), эквивалентную 2,5 г
растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном
вакуумном испарителе при температуре 40 -С. Водный остаток
переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл
насыщенного раствора хлорида натрия и 15 мл гексана. Смесь
встряхивают в течение 1 мин. и после ее расслоения отделяют
гексановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр,
заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу
вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном повторяют
еще два раза (по 15 мл). Объединенный гексановый экстракт,
содержащий трифлоксистробин, выпаривают на роторном испарителе
досуха при температуре 30 -С. Дальнейшую очистку экстракта
проводят по п. 2.6.3.
2.6.1.3. Почва. Навеску (25 г) воздушно-сухой почвы помещают в
коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон -
вода (2:1, по объему) и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. К
суспензии добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке
Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают 50 мл
смеси ацетон - вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта
отбирают аликвоту раствора (около 27 мл), эквивалентную 5 г почвы,
и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при
температуре 40 -С. Водный остаток переносят в делительную воронку
емкостью 100 мл, приливают 15 мл бидистиллированной воды и 15 мл
гексана. Смесь встряхивают в течение 1 мин. и после ее расслоения
отделяют гексановую фракцию, которую пропускают через стеклянный
фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную
колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном
повторяют еще два раза (по 15 мл). Объединенный гексановый
экстракт, содержащий трифлоксистробин, выпаривают на роторном
испарителе досуха при температуре 30 -С. Дальнейшую очистку
экстракта проводят по п. 2.6.3.
Оставшуюся после обработки гексаном водную фазу подкисляют 1 н
HCl до рН 2 и переносят в делительную воронку емкостью 100 мл.
Приливают 10 мл хлористого метилена и воронку встряхивают в
течение 1 мин. После разделения слоев отделяют дихлорметановую
фракцию, которую пропускают через стеклянный фильтр, заполненный
безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 20
мл. Экстракцию водной фракции хлористым метиленом повторяют еще
два раза (10 + 10 мл). Объединенный дихлорметановый экстракт,
содержащий метаболит ЦГА 321113, выпаривают на роторном испарителе
досуха при температуре 30 -С. Дальнейшую очистку экстракта
проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.2. Метилирование
К сухим остаткам водного (из п. 2.6.1.1) и почвенного (из п.
2.6.1.3) экстрактов, содержащим метаболит ЦГА 321113, приливают
соответственно 2 и 3 мл эфирного раствора диазометана (из п.
2.5.5), перемешивают, закрывают колбочки пробками и оставляют
стоять в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем растворы
упаривают досуха током воздуха.
2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов воды,
растительного материала и почвы (из п. п. 2.6.1.1, 2.6.1.2 и
2.6.1.3) или метилированных по п. 2.6.2 экстрактов воды и почвы,
количественно переносят тремя 1-мл порциями элюента N 1 в
подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.6). Промывают
колонку 40 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Трифлоксистробин
элюируют 60 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу
емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе
при температуре 30 -С. Сухие остатки экстрактов воды, почвы и
яблок растворяют в 2 мл толуола и анализируют по п. 2.7.
2.7. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф Tracor 570 (США)
63
с детектором по захвату электронов (Ni )
-9
Показания электрометра 1 х 10 А
Скорость движения ленты самописца 15 см/ч
Колонка стеклянная, спиральная 1800 х 2 мм
Неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе
W(HP) (0,15 - 0,18 мм)
Температура испарителя 250 -С,
термостата колонки 240 -С,
детектора 300 -С
Скорость потока газа-носителя (азот) 30 мл/мин.
Объем вводимой пробы 2 мкл
Время удерживания трифлоксистробина 2 мин. 20 с
Предел детектирования 0,05 нг
Линейный диапазон детектирования 0,05 - 0,5 нг
Альтернативная фаза:
3% SE-30 на Газ-хром Q (0,15 - 0,20 мм)
Колонка стеклянная 1800 х 2 мм
Условия хроматографирования те же.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю
высоту пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с
концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют толуолом.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание трифлоксистробина рассчитывают методом абсолютной
калибровки по формуле:
H х А х V
1
X = ----------,
Н х m
0
где:
Х - содержание трифлоксистробина в пробе, мг/кг или
мг/куб. дм;
Н - высота пика образца, мм;
1
Н - высота пика стандарта, мм;
0
А - концентрация стандартного раствора трифлоксистробина,
мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
m - объем или масса анализируемой части образца, мл или г (для
воды - 100 мл; для яблок - 2,5 г; для почвы - 5 г).
Содержание метаболита ЦГА 321113 рассчитывают методом
абсолютной калибровки по формуле:
H х А х V
1
X = ----------,
Н х m х К
0
где:
Х - содержание ЦГА 321113 в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
Н - высота пика образца, мм;
1
Н - высота пика стандарта, мм;
0
А - концентрация стандартного раствора трифлоксистробина,
мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
мл;
m - объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для
воды - 100 мл; для почвы - 5 г);
К - коэффициент пересчета, учитывающий соотношение
молекулярных масс трифлоксистробина и ЦГА 321113, равный 1,035.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при
работе с органическими растворителями, токсичными веществами,
электронагревательными приборами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений
осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного
химического анализа".
5. Разработчики
Павлова Н.Н., н.с., канд.биол.н.; Талалакина Т.Н., н.с.,
Чканикова Е.В., н.с., канд.мед.н.; Макеев А.М., зав. лаб.,
канд.биол.н. ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о
Большие Вяземы.
|
