Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
16 марта 2003 года
Дата введения
1 июля 2003 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
ТРИБЕНУРОН-МЕТИЛА В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.1242-03
1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.
Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.
Тимирязева; при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава
России. Разработчики методики указаны в конце.
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией
по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения
Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003
г.
4. Введены впервые.
5. Введены с 1 июля 2003 г.
Настоящие Методические указания устанавливают метод
высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в
атмосферном воздухе массовой концентрации трибенурон-метила в
диапазоне 0,0024 - 0,024 мг/куб. м.
Трибенурон-метил - действующее вещество препарата ГРАНСТАР, СТС
(750 г/кг), фирма-производитель Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.,
Швейцария.
2-{[N-(6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-ил)-N-метилкарбамоил]-
сульфамоил} - бензойная кислота, метиловый эфир (IUPAC).
Эмпирическая формула: C H N O S.
15 17 5 6
Молекулярная масса: 395,4.
Светло-коричневое кристаллическое вещество без запаха
(технический продукт с содержанием основного вещества > 95%).
-5
Температура плавления 141 -С. Давление паров при 25 -С: 5,2 х 10
мПа. Растворимость в органических растворителях при 25 -С (мг/куб.
дм): ацетонитрил - 54,2; ацетон - 43,8; этилацетат - 17,5; метанол
- 3,39; четыреххлористый углерод - 3,12; гексан - 0,028.
Растворимость в воде при 20 -С (г/куб. дм): 0,05 (pH 5); 2,04 (рН
7).
Константа диссоциации рКа - 5.
Трибенурон-метил стабилен при температуре до 45 -С. Устойчив к
гидролизу при pH 8 - 10, быстро разрушается в водных растворах при
pH < 7 и pH > 12. Относительно неустойчив в большинстве
органических растворителей.
Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.
Область применения препарата. Трибенурон-метил рекомендуется к
применению в качестве послевсходового гербицида широкого спектра
активности для борьбы со многими широколистными сорными растениями
на посевах зерновых колосовых культур.
Ориентировочно безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в
атмосферном воздухе - 0,003 мг/куб. м.
1. Погрешность измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не
превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности - 0,95.
2. Метод измерения
Измерения концентраций трибенурон-метила выполняют методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной
фазе с ультрафиолетовым детектором.
Концентрирование трибенурон-метила из воздуха осуществляют на
бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят
этиловым спиртом.
Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 - 5
нг.
Определению не мешают компоненты препаративной формы, а также
пестициды, применяемые при выращивании зерновых колосовых культур.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф Perkin-Elmer
(США) с ультрафиолетовым детектором N Госреестра 15945-97
Жидкостный хроматограф Милихром (Россия)
с ультрафиолетовым детектором ТУ 25-7405.0009-89
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ
(ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) или
аспирационное устройство ЭА-1 ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67 ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена
деления 1 -С, пределы измерения 0 - 55 -С ТУ 215-73Е
Мерные колбы, вместимостью 50 и 100 куб. см ГОСТ 1770
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см ГОСТ 29227
Допускается использование средств измерения с аналогичными или
лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Трибенурон-метил с содержанием действующего
вещества 99,4% (Дюпон, Швейцария)
Аммиак водный, чда ГОСТ 3760-79
Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ 6-09-4326-76
Вода бидистиллированная
или деионизированная ОСТ 6709-72
Жидкость полиметилсилоксановая ПМС-100
Кислота ортофосфорная, ч, 85% ГОСТ 6652-80
Этиловый спирт ГОСТ Р 51652-00
Метиловый спирт, хч ГОСТ 6995-77
3.3. Вспомогательные устройства
Воронки химические, конусные, диаметром
34 - 40 мм ГОСТ 25336-82Е
Воронка Бюхнера, диаметром 20 мм ГОСТ 9147-80Е
Колба Бунзена ГОСТ 25336-82Е
Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью
100 куб. см ГОСТ 10394-72
Насос водоструйный ГОСТ 10696-75
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-76
или ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi, Швейцария
Холодильник водяной, обратный ГОСТ 9737-70
Хроматографическая колонка стальная,
длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм,
содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением
5 мкм (фирма HICHROM)
Хроматографическая колонка стальная, длиной
64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая
Сепарон С18, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного
хроматографа, вместимостью 50 куб. мм
Установка для перегонки растворителей
Груша резиновая
Стеклянные палочки
Допускается применение хроматографических колонок и другого
оборудования с аналогичными или лучшими техническими
характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности,
установленные для работ с токсичными, едкими,
легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.
4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного
хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии
с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают лиц, имеющих квалификацию не
ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном
хроматографе.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу
проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) -С и относительной
влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в
условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила,
подготовку подвижных фаз для ВЭЖХ, силиконирование стеклянной
посуды, приготовление растворов, кондиционирование
хроматографических колонок, установление градуировочной
характеристики, отбор проб.
7.1. Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом
фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед
употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным
карбонатом калия.
7.2. Подготовка подвижных фаз для ВЭЖХ
7.2.1. Подвижная фаза N 1
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 560 куб. см
бидистиллированной воды, 1 куб. см ортофосфорной кислоты,
добавляют 440 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и
дегазируют.
7.2.2. Подвижная фаза N 2
7.2.2.1. Приготовление 0,2%-ного раствора ортофосфорной
кислоты. В мерную колбу объемом 1000 куб. см помещают 500 куб. см
бидистиллированной воды, 2 куб. см ортофосфорной кислоты,
перемешивают, доводят до метки бидистиллированной водой и еще раз
тщательно перемешивают.
7.2.2.2. Приготовление подвижной фазы N 2. В мерную колбу
вместимостью 1000 куб. см помещают 500 куб. см ацетонитрила, 100
куб. см метилового спирта и 400 куб. см 0,2%-ного раствора
ортофосфорной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, фильтруют и
дегазируют.
7.3. Приготовление 0,012 н аммиачного раствора ацетонитрила
В мерную колбу объемом 1000 куб. см помещают 1,6 куб. см 25%-
ного водного раствора аммиака, доводят до метки ацетонитрилом и
тщательно перемешивают.
7.4. Силиконирование стеклянной посуды
Для силиконирования стекла (создания на поверхности стекла
органилсиликоновой пленки с хорошими гидрофобными и адгезивными
свойствами) использован 3%-ный раствор полиметилсилоксановой
жидкости ПМС-100 в хлороформе. Перед силиконированием посуду
тщательно моют и обезжиривают, просушивают, затем на несколько
минут заливают раствором силикона (возможно его многократное
использование). После выдерживания в сушильном шкафу при
температуре 180 - 210 -С в течение 2 ч посуда готова к работе.
7.5. Приготовление градуировочных растворов
7.5.1. Исходный раствор трибенурон-метила для градуировки
(концентрация 100 мкг/куб. см)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г
трибенурон-метила, растворяют в 50 - 70 куб. см 0,012 н аммиачного
раствора ацетонитрила, доводят до метки этим же раствором,
тщательно перемешивают. Раствор хранится в морозильной камере в
течение суток.
Рабочие градуировочные растворы трибенурон-метила готовят
объемным методом путем последовательного разбавления исходного
стандартного раствора.
7.5.2. Рабочие растворы трибенурон-метила для градуировки
7.5.2.1. Градуировочные растворы N 1 - 5 (концентрация 0,5 - 5
мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по
0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 куб. см исходного стандартного раствора с
концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.5.1), доводят до метки
подвижной фазой N 2 (п. 7.2.2), тщательно перемешивают, получают
рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией трибенурон-метила 0,05;
0,1; 0,2; 0,3 и 0,5 мкг/куб. см соответственно.
7.5.2.2. Градуировочные растворы N 6 - 11 (концентрация 0,05 -
1,0 мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 50 куб. см помещают
по 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 куб. см стандартного раствора N 5 с
концентрацией 5 мкг/куб. см, доводят до метки подвижной фазой N 1
(п. 7.2.1), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 6
- 11 с концентрацией трибенурон-метила 0,05; 0,1; 0,2; 0,3, 0,5 и
1,0 мкг/куб. см соответственно.
Рабочие стандартные растворы готовят непосредственно перед
хроматографированием.
7.6. Отбор проб
Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ
17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения
загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух со
скоростью 5 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента",
помещенный в фильтродержатель.
Для измерения концентрации трибенурон-метила на уровне 0,8 ОБУВ
атмосферного воздуха необходимо отобрать 45 - 100 куб. дм воздуха.
Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые
пакеты, в холодильной камере при +4 -С - 2 дня.
7.7. Кондиционирование хроматографических колонок
Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.2) в течение 30 мин.
при скорости подачи растворителя 0,4 или 0,1 куб. см/мин. до
установления стабильной базовой линии.
7.8. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади
пика (отн. единицы) от концентрации трибенурон-метила в растворе
(мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5
растворам для градуировки: растворы N 1 - 5 или растворы N 6 - 11.
При проведении измерений с детектированием при длине волны 230
нм используют растворы для градуировки N 6 - 10, при длине волны
254 нм - растворы N 1 - 5 или N 7 - 11.
В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм градуировочного
раствора N 6 - 11 или по 10 куб. мм раствора N 1 - 5 и анализируют
в условиях хроматографирования по п. 7.7.1. Осуществляют не менее
3 параллельных измерений.
7.8.1. Условия хроматографического анализа
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
7.8.1.1. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором
Perkin-Elmer (США)
Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм,
содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ортофосфорная кислота
(44:56:0,1, по объему).
Скорость потока элюента: 0,4 куб. см/мин.
Рабочая длина волны: 230 (254) нм.
Чувствительность:
0,01 ед. абсорбции на шкалу (длина волны 230 нм),
0,005 ед. абсорбции на шкалу (длина волны 254 нм).
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
Ориентировочное время выхода трибенурон-метила: 7,8 - 8,0 мин.
Линейный диапазон детектирования:
1 - 10 нг (при длине волны 230 нм),
2 - 20 нг (при длине волны 254 нм).
7.8.1.2. Альтернативные условия хроматографирования
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром
(Россия).
Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм,
содержащая
Сепарон С18, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил-метанол-0,2%-ная ортофосфорная
кислота (50:10:40, по объему).
Скорость потока элюента: 100 куб. мм/мин.
Рабочая длина волны: 254 нм.
Чувствительность: 0,2 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 10 куб. мм.
Ориентировочное время выхода трибенурон-метила: 4,3 - 4,4 мин.
Линейный диапазон детектирования: 5 - 50 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем рабочий градуировочный
раствор с максимальной для используемых условий
хроматографирования концентрацией, разбавляют соответствующей
подвижной фазой.
Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 1 - 2
стандартных растворов различной концентрации. Если получаемые
результаты отличаются более чем на 6% от данных, заложенных в
градуировочную характеристику, ее строят заново, используя
свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.
8. Выполнение измерений
Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан
вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см этилового спирта,
помещают на встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр
еще дважды обрабатывают новыми порциями этилового спирта объемом
10 куб. см.
Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на
ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40
-С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого
воздуха, остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы N 1 (п.
7.2.1) или в 0,5 куб. см подвижной фазы N 2 (п. 7.2.2) и
анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п.
7.8.1.1 или 7.8.1.2, соответственно.
Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз.
Устанавливают площадь пика.
Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование
холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного
фильтра.
9. Обработка результатов измерений
Массовую концентрацию трибенурон-метила в пробе атмосферного
воздуха, X, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:
C x W
X = -----,
V
0
где:
C - концентрация трибенурон-метила в хроматографируемом
растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с
величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;
W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
куб. см;
V - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный
0
к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0 -С),
куб. дм.
0,357 x P x ut
V = --------------,
0 273 + T
где:
T- температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор),
-С;
P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;
u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;
t - длительность отбора пробы, мин.
Примечание. Идентификация и расчет концентрации трибенурон-
метила в пробах могут быть проведены с помощью компьютерных
программ обработки хроматографических данных.
10. Оформление результатов измерений
_
За результат анализа (X) принимается среднее арифметическое
_
результатов двух параллельных определений X и Х (X = (X + Х ) /
1 2 1 2
2), расхождение между которыми не превышает значений норматива
оперативного контроля сходимости (d): |X - Х | <= d.
1 2
_
d x X
отн.
d = --------, мг/куб. м,
100
где:
d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;
d - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен
отн.
10%).
При превышении норматива оперативного контроля сходимости
измерения повторяют. При повторном превышении норматива d выясняют
причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и
устраняют их.
Результат количественного анализа представляют в виде:
_
- результат анализа X (мг/куб. м), характеристика погрешности
_
дельта, %, Р = 0,95 или X +/- ДЕЛЬТА мг/куб. м, Р = 0,95, где
_
дельта x X
ДЕЛЬТА = ----------, мг/куб. м.
100
Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что
и погрешность.
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений
осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ.
Внутренний контроль качества результатов количественного
химического анализа".
12. Разработчики
Ракитский В.Н., Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н.
(Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи
Московской обл.).
|
