Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
17 октября 2005 года
Дата введения
с момента утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦЕТИЛПИРИДИНИЙ ХЛОРИДА
В МЯСЕ КУР И ПРОДУКТАХ ЕГО ПЕРЕРАБОТКИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2009-05
1. Методические указания подготовлены ГУ НИИ питания РАМН.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе
по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия
человека (протокол N 3 от 6 октября 2005 г.).
3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в
сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным
государственным санитарным врачом Российской Федерации, академиком
РАМН Г.Г. Онищенко 17 октября 2005 г.
4. Введены впервые.
Настоящие Методические указания устанавливают
хроматографическую методику выполнения измерений массовой
концентрации цетилпиридиний хлорида (ЦПХ) в мясе кур и продуктах
его переработки и предназначены для проведения лабораторных
исследований мяса кур и продуктов его переработки учреждениями
Роспотребнадзора Российской Федерации, на предприятиях и в
организациях, осуществляющих контроль качества и безопасности
продовольственного сырья и продуктов питания в соответствии с
СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и
пищевой ценности пищевых продуктов".
1. Краткая характеристика препарата
Общепринятое название: цетилпиридиний хлорид (ЦПХ).
Название по номенклатуре ИЮПАК: N-цетилпиридиний хлорид.
Структурная формула: (не приводится).
Эмпирическая формула: C H NCl, моногидрат М. м. 339,5
21 38
Физические свойства: белый порошок, без запаха, температура
плавления 77 - 83 -С, рН 1%-ного водного раствора 6,0 - 7,0.
Хорошо растворим в воде, спирте и хлороформе, нерастворим в эфире.
Торговая марка: технологическое вспомогательное средство
"Секур" ("Cecure").
Фирма-производитель: "Safe Food Corporation", США.
Форма выпуска: водный раствор цетилпиридиний хлорида и
пропиленгликоля.
Область применения. Технологическое вспомогательное средство
"Секур" предназначено для использования в пищевой промышленности
для противомикробной обработки поверхности сырых тушек домашней
птицы. Средство распыляется на сырые тушки домашней птицы перед
погружением в охладитель в количестве не более 0,66 грамм ЦПХ на
килограмм тушки.
Гигиенические нормативы. Установленное предельно допустимое
содержание остатков ЦПХ составляет 4,0 мг на кг птицы.
2. Методика определения остаточных количеств ЦПХ в мясе кур
и продуктах его переработки методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении остаточных количеств ЦПХ в
мясе кур и продуктах его переработки методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектированием
при длине волны 260 нм после водно-спиртовой экстракции ЦПХ из
анализируемых проб и обезжиривании экстракта. Количественное
определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Метрологические характеристики метода
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ
---------T-------------------------------------------------------¬
¦Анализи-¦ Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 10 ¦
¦руемый +--------T-------------T---------T---------T------------+
¦объект ¦предел ¦ диапазон ¦среднее ¦стандарт.¦ доверит. ¦
¦ ¦обнару- ¦определяемых ¦значение ¦ отклон.,¦ интервал ¦
¦ ¦жения, ¦концентраций,¦определе-¦ S ¦ среднего ¦
¦ ¦мг/кг ¦ мг/кг ¦ния, % ¦ ¦ результата,¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ %, +/- ¦
+--------+--------+-------------+---------+---------+------------+
¦Кожа и ¦ 0,02 ¦ 0,08 - 5 ¦ 86,6 ¦ 3,4 ¦86,6 +/- 2,1¦
¦мясо кур¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
L--------+--------+-------------+---------+---------+-------------
Таблица 2
ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕТИЛПЕРИДИНИЙ ХЛОРИДА
В КОЖЕ И МЯСЕ КУР (5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)
--------------T----------T----------T-------------T--------------¬
¦Анализируемый¦Добавлено ¦Обнаружено¦Доверительный¦ Полнота ¦
¦ объект ¦ЦПХ, мг/кг¦ЦПХ, мг/кг¦интервал, +/-¦определения, %¦
+-------------+----------+----------+-------------+--------------+
¦Кожа кур ¦ 5 ¦ 4,63 ¦ 0,05 ¦ 92,6 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦ 2 ¦ 1,67 ¦ 0,04 ¦ 83,5 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦ 0,8 ¦ 0,70 ¦ 0,01 ¦ 87,5 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦ 0,2 ¦ 0,16 ¦ 0,01 ¦ 80,0 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦Среднее: ¦ 85,9 ¦
+-------------+----------T----------T-------------+--------------+
¦Мясо кур ¦ 5 ¦ 4,83 ¦ 0,04 ¦ 96,6 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦ 2 ¦ 1,69 ¦ 0,04 ¦ 84,5 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦ 0,8 ¦ 0,66 ¦ 0,01 ¦ 82,5 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦ 0,2 ¦ 0,17 ¦ 0,02 ¦ 85,0 ¦
¦ +----------+----------+-------------+--------------+
¦ ¦Среднее: ¦ 87,2 ¦
L-------------+-----------------------------------+---------------
2.2. Реактивы
Спирт этиловый ректификованный технический, ГОСТ 18300;
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74;
Н-Гексан, х.ч., по ТУ 6-09-4521-84;
Вода дистиллированная, ГОСТ 6709;
Кислота трифторуксусная > 99,8%, х.ч., ГОСТ 18270-72;
Цетилпиридиний хлорид моногидрат, Zeeland Chemicals Inc.,
(США).
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостной хроматограф высокого давления с подачей растворителя
от 0,1 до 5,0 куб. см/мин., оборудованный спектрофотометрическим
детектором с переменной длиной волны (Jasco) и системой для сбора
и обработки хроматографических данных Мультифром 1.5х (Амперсенд,
Россия).
Колонка для ВЭЖХ PLRP-S (Polymer Labs, США) с размером частиц 5
мкм; длина колонки - 25 см, внутренний диаметр колонки - 0,46 см.
Микрошприцы объемом 10 и 25 мкл для жидкостной хроматографии
(Hamilton, США).
Спектрофотометр СФ-26 или подобный, позволяющий проводить
измерения при длинах волн 200 - 350 нм, с допустимой абсолютной
погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%.
Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С, ТУ 64-1-2451-78.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим
пределом взвешивания 200 г и погрешностью +/- 0,0001 г.
Ротационный испаритель ИР-1М или аналогичный, ТУ 25-11-917.
Дистиллятор.
Блендер.
Баллон с сжатым азотом квалификации ПНГ.
Воронка делительная на 250 куб. см по ГОСТ 10054.
Колбы мерные наливные 2-50-2, 2-100-2, 2-250-2, 1-1000-2 по
ГОСТ 1770.
Колбы грушевидные по ГОСТ 25336 с конусом 14/23 вместимостью
100 куб. см.
Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 100 куб. см.
Пипетки 4-1-2 или 5-1-2, 4-2-10 или 5-2-10, 4-2-25 или 5-2-25
по ГОСТ 29227.
Фильтры обеззольные ФО-ФС-15 "Красная лента" и "Синяя лента" по
ТУ 2642-001-42624157-98.
Допускается использование приборов и посуды с метрологическими
характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в
МУК.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 6687.0. Для
длительного хранения пробы мяса и кожи птицы замораживаются и
хранятся при -18 -С.
Перед анализом снятую кожу или отделенное мясо кур перемалывают
на мясорубке и тщательно перемешивают в блендере.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Приготовление стандартных растворов ЦПХ и калибровка
хроматографа
0,025 г кристаллического ЦПХ количественно переносят в мерную
колбу вместимостью 250 куб. см, растворяют в 150 куб. см 95%-ного
этанола, доводят 95%-ным этанолом до метки и тщательно
перемешивают. Получают основной стандартный раствор в 95%-ном
этаноле с массовой долей ЦПХ 0,1 мг/куб. см.
Для построения градуировочной кривой методом последовательного
разбавления подвижной фазой готовят рабочие стандартные растворы с
содержанием ЦПХ 0,01; 0,002; 0,0005 и 0,0002 мг/куб. см.
Хроматографируют по 10 - 20 мкл каждого полученного раствора.
Хроматографирование проводят трижды и строят график зависимости
средних площадей пиков от концентрации ЦПХ в мкг/мл.
Основной и рабочие стандартные растворы ЦПХ хранят в стеклянной
посуде (мерной колбе) с притертой пробкой в прохладном месте (при
температуре около 0 -С). Сроки годности основного раствора
полгода, рабочего - 2 недели.
2.5.2. Приготовление подвижной фазы и кондиционирование
хроматографической колонки
Навеску 1 г +/- 0,1 г трифторуксусной кислоты (взвешивание
производят в закрытой посуде) помещают в мерную колбу вместимостью
1000 куб. см, содержащую около 200 мл дистиллированной воды,
доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Концентрация полученного раствора - 0,1%.
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 700 куб. см
ацетонитрила, примерно 250 куб. см 0,1%-ного раствора
трифторуксусной кислоты, перемешивают и выдерживают до комнатной
температуры. Затем доводят до метки 0,1%-ным раствором
трифторуксусной кислоты, тщательно перемешивают. Раствор
дегазируют.
Хроматографическую колонку кондиционируют до минимального
дрейфа базовой линии.
2.5.3. Подготовка образца
Навеску 10 г +/- 0,01 измельченного и перемешанного в блендере
образца кожи или мяса птицы помещают в коническую колбу
вместимостью 250 куб. см, добавляют 100 куб. см 95%-ного этанола,
встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 минут.
Экстракт фильтруют через бумажный складчатый фильтр "красная
лента" в мерный цилиндр вместимостью 100 куб. см, замеряют
полученный объем. Фильтрат количественно порциями переносят в
круглодонную колбу для упаривания, смывая остатки экстракта из
цилиндра 95%-ным спиртом. Спирт упаривают в вакууме на ротационном
испарителе при температуре 40 - 45 -С. К остатку добавляют 25 мл
ацетонитрила и 20 мл гексана. После встряхивания содержимое колбы
количественно переносят в делительную воронку. Колбу для
упаривания ополаскивают 5 мл ацетонитрила и 5 мл гексана и
жидкость также переносят в делительную воронку. Содержимое
делительной воронки встряхивают, после разделения слоев
отбрасывают верхний гексановый слой. Обезжиривание
ацетонитрильного слоя повторяют дважды, встряхивая его в
делительной воронке с 10 мл гексана, насыщенного ацетонитрилом,
каждый раз отбрасывая верхний гексановый слой. Если жидкости
расслаиваются с трудом, в воронку добавляют немного сухого хлорида
натрия и содержимое повторно встряхивают. Обезжиренный
ацетонитрильный экстракт помещают в круглодонную колбу, упаривают
в вакууме на ротационном испарителе при температуре 40 - 45 -С и
отдувают в токе азота досуха на теплой водяной бане. Остаток
растворяют в 3 куб. см подвижной фазы, переносят в пикнометр
вместимостью 5 куб. см, ополаскивают колбу для упаривания еще 1
куб. см подвижной фазы и доводят объем до метки подвижной фазой.
Содержимое пикнометра перемешивают и фильтруют через бумажный
складчатый фильтр "синяя лента". При необходимости фильтруют через
нейлоновый фильтр. При анализе используют аликвоты 0,005 - 0,020
куб. см.
3. Описание определения
3.1. Условия хроматографирования
Хроматографическая колонка: PLRP-S (Polymer Labs), с размером
пор 100 ангстрем, размером частиц 5 мкм; параметры колонки 250 x
4,6 мм ID.
Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,1% раствор трифторуксусной
кислоты 80:20% об., скорость подачи подвижной фазы 1,0 мл/мин.
Детектирование: УФ, лямбда = 260 нм. Чувствительность 0,01 е.
а.
Объем вводимой пробы 5 - 20 мкл.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 2 - 200 нг
ЦПХ.
Абсолютное время удерживания ЦПХ в приведенных условиях - 8,7
+/- 0,1 минут.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза, вычисляют среднюю
площадь пика, соответствующего ЦПХ.
Альтернативные условия хроматографического разделения: Колонка
с силикагелем, химически связанным с цианпропилом (например,
Nucleosil-CN) с размером частиц 5 мкм; параметры колонки 250 x 4,6
мм ID. Подвижная фаза: метанол - водный 8 mМ раствор
тетрабутиламмоний бромида (45:55% об.), скорость подачи подвижной
фазы 1,0 мл/мин. Условия детектирования аналогичны
вышеприведенным. Время удерживания ЦПХ - около 6 минут.
3.2. Обработка результатов анализа
Концентрацию ЦПХ в анализируемом экстракте образца определяют
либо методом градуировочного графика, либо сравнением площадей
пиков ЦПХ стандартного раствора и раствора образца, т.е. методом
внешнего стандарта.
Для расчета используют стандартный раствор, площадь пика
которого наиболее близка к площади пика ЦПХ в образце.
Х = С х 1000 х S x V / m x S ,
ст х ст
где:
Х - содержание ЦПХ в пробе мяса или кожи птицы, мг/кг;
C - содержание ЦПХ в стандартном растворе, мг/мл;
ст
S - площадь пика ЦПХ в анализируемом образце;
x
S - площадь пика стандарта;
ст
V - объем очищенного экстракта (5 мл), мл;
М - навеска образца, г.
4. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при
работе с органическими растворителями, токсичными веществами и
электроприборами.
|
